Znaczenie kliniczne ekspresji mieloid-antygen w ostrej białaczce limfoblastycznej wieku dziecięcego ad

Zliczono co najmniej 500 komórek. Próbki rutynowo wybarwiano barwnikiem Wrighta-Giemsy, odczynnikiem periodycznego acidSchiff i plamką z czarnej B Sudanu i wybarwiano je na obecność merooperoksydazy i esterazy kwasu alfa-naftylowego. Białaczki poddano podklasyfikacji jako L1 lub L2, zgodnie z klasyfikacją francusko-amerykańsko-brytyjską.20, 21 Analizę cytogenetyczną przeprowadzono po hodowli komórek szpiku kostnego w RPMI 1640 (Irvine Scientific, Santa Ana, CA) przez 24 do 72 godzin, zebrano i traktowano demekolcyną (Colcemid) przez godzinę. Komórki traktowano hipotonicznym roztworem chlorku potasu (0,4 procent) i utrwalano w kwasie metanolowo-octowym (3: 1). Przygotowano szkiełka i wykonano banding Giemsa.
Immunofenotypowanie
Przygotowanie komórki
Próbki szpiku kostnego traktowane heparyną rozcieńczono 1: buforem Hanksa z roztworem soli fizjologicznej (Irvine Scientific), nawarstwiono na gradienty Ficoll-Hypaque (Pharmacia, Piscataway, NJ) i odwirowano przy 2000 obr / min przez 30 minut. Jednojądrzaste komórki zebrano na granicy faz Ficoll-Hypaque i osocza i przemyto dwa razy zbuforowanym roztworem soli fizjologicznej Hanksa. Po ostatnim przemyciu komórki ponownie zawieszono w RPMI 1640 z L-glutaminą (2 mM), penicyliną (50 U na mililitr) i dodano streptomycynę (50 mg na mililitr).
Przeciwciała monoklonalne
Tabela 1. Tabela 1. Determinanty antygenowe. Panel monoklonalny-przeciwciało został wybrany do identyfikacji antygenów różnicujących specyficznych względem układu limfatycznego i mieloidalnych (Tabela 1). Zastosowanie panelu przeciwciał pozwoliło zidentyfikować zarówno rodowód, jak i etap różnicowania komórek białaczkowych.
Pośrednia immunofluorescencja
Komórki białaczkowe inkubowano z optymalnymi stężeniami każdego przeciwciała monoklonalnego (na podstawie zaleceń producenta) przez 30 minut w temperaturze 4 ° C. Komórki przepłukano dwukrotnie w Sorvall Cell Washer (Ortho Diagnostic Systems, Raritan, NJ) z Immusal (American Dade, Denville, NJ) i inkubowano z 50 ml rozcieńczenia 1:20 powinowactwa z koniugatem izotiocyjanianu fluoresceiny (FITC). oczyszczona immunoglobulina kozia antimouse (GAM-FITC) (Cappel, Cooper Biomedical, West Chester, PA). Po dwukrotnym przemyciu komórek utrwalono je 1% paraformaldehydem i analizowano za pomocą sortownika komórek aktywowanych fluorescencyjnie Coulter Epics V lub cytometru przepływowego Becton Dickinson.
Podwójnie zabarwiona immunofluorescencja
Komórki inkubowano jednocześnie z optymalnymi stężeniami przeciwciała monoklonalnego znakowanego FITC i przeciwciała monoklonalnego znakowanego fikoerytryną przez 30 minut w temperaturze 4 ° C. Komórki przemyto dwukrotnie Immusal w Sorvall Cell Washer, utrwalono w procentach paraformaldehydu i analizowano za pomocą cytometrii przepływowej.
Terminalna deoksynukleotydylowa transferaza (TdT)
Rozmyte w cytocynie wymazy utrwalano w absolutnym metanolu przez 30 minut w 4 ° C, inkubowano z Coulter Blocking Agent (CBA-1, Coulter, Hialeah, Fla.) Przez 20 minut w temperaturze pokojowej, a następnie inkubowano z mysim antyludzkim przeciwciałem monoklonalnym TdT ( Coulter) lub niespecyficzne przeciwciało mysie przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Preparaty przemyto dwukrotnie solanką buforowaną fosforanem, inkubowano z GAM-FITC przez 30 minut w temperaturze pokojowej i ponownie przepłukano
[przypisy: zalecenia po ekstrakcji, tahitian noni, czynniki urbanistyczne ]

Tags: , ,

Comments are closed.

Powiązane tematy z artykułem: czynniki urbanistyczne tahitian noni zalecenia po ekstrakcji

Bazylika – co to jest ?
Bazylika - jest to honorowy tytuł, ktory nadawany jest badz przez papieża lub tez na drodze prawa zwyczajowego. Tytul ten otrzymują kościoły ktore wsrod innych tego typu obiektow wyróżniają się ponadstandartowa wartością zabytkową lub tez liturgiczną,badz pielgrzymkową oraz duszpasterską.
Polecamy również:
Przeczytaj też:
Montauban

Motyw architektoniczny miasta Montauban został w sposób charakterystyczny nagięty do potrzeb obronnych miasta gotyckiego. Odbija się to na ukształtowaniu narożników placu. Zbiegające się tu z dwóch kierunków ulice nie mają bezpośredniego wylotu na plac, lecz łączą się parami tworząc wąskie przejście, prowadzące pod arkadami. W razie wdarcia się nieprzyjaciela do środka miasta i zajęcia przezeń […]

Biecz

Źródłowo udowodnionym jest, iż w r. 1303 lub nieco przedtem, zamek królewski Biecz w zamianie odstąpiony został biskupom krakowskim, w których rękach jednak nie długo pozostawał i wrócił w stale posiadanie królów polskich. W sąsiedztwie zamku ugrupowała się osada, która od Kazimierza Wielkiego użytkuje przywileje miastom tylko przysługujące. Tymczasem pierwotny zamek musiał ulec zniszczeniu i […]

Rozrost różnorodnych funkcji śródmiejskiej ulicy handlowej

Wszechstronny rozrost różnorodnych funkcji śródmiejskiej ulicy handlowej i przylegających do niej budynków winien zwrócić szczególniejszą uwagę nowoczesnego urbanisty na procesy gospodarcze i techniczne, zachodzące w głębi domu, jego oficyn, na całej powierzchni działki i bloku urbanistycznego. Chęć wyzyskania do ostatka korzyści gospodarczych prowadzi tu zwykle do zupełnego nie liczenia się z podstawowymi postulatami architektury i […]

DevURL
Partnerzy serwisu: